МОСКОВСКАЯ ВСТРЕЧА
Форум самогонщиков Сайт Барахолка Магазин МОСКОВСКАЯ ВСТРЕЧА

Брага на ферментах дикой плесени и не только

Форум самогонщиков Сбраживание
1 2 3 1
0kauri0 Бакалавр SPb 50 120
14 Янв. 16, 14:12
После прочтения нескольких тем на форуме ([Новый рецепт браги без сахара] и [Брага за 15 ЧАСОВ дрожжи ?!]) мне захотелось самому изолировать штамм плесени для осахаривания крахмального сырья. Так как я раньше занимался выращиванием грибов мне знакомы методы выделения чистых культур. Всего было изолировано 26 штаммов, среди них черных аспергиллов  18 штаммов, зеленых аспергиллов 4 штамма и ризопус 4 штаммов. Пеннициллы не изолировались ввиду их медленного роста. Штаммы были изолированы из следующих продуктов:
чай пуэр — 6 черных аспергиллов
черный чай — 2  черных аспергилла
зеленый чай — 1 черный аспергилл
арахис —   3 черных аспергилла, 3 ризопуса
грецкий орех —  3 черных аспергилла
кукурузная сечка — 4  зеленых аспергилла, 2 черных
лук — 1 ризопус
перловка — 1 черный аспергилл
Чаи с алиекспресс, арахис — аргентина, остальное россия.
Все это было изолировано не за 1 раз, а примерно в течении 2 месяцев. Для применения в бражном деле больше всего подходят аспергиллы, они быстро обрастают зерно имеют слабовыраженый запах и дают много спор всвязи с этим удобно размножать, но они могут выделять токсины, примерно 20% видов черных апергиллов выделяют охратоксин и ~50% зеленых аспергиллов выделяют афлатокин. Но уровни производства токсинов могут очень сильно разниться от штамма к штамму, поэтому тут полная лотерея. Ризопусы токсинов не производят , но дают мало спор и очень плотный мицелий, пенициллы сильно пахнут, так же могут производить охратоксин и медленно растут.

Чтобы не ставить брагу на каждом изоляте, было проведено тестирование амилолитической и целлюлолитической активности, методом измерения скорости поедания крахмала и целлюлозы соответственно, тестирования проводились в разное время по мере накопления изолятов. Для тестирования применялась жидкая среда следующего состава: NH4NO3 — 1 г, KHPO4 — 0.5 г, MgSO4*7H2O — 0.5 г, вода 1000 мл, в качестве источника углерода применялся либо крахмал 10 г, либо размоченная упаковка от яиц 10 г. Среда заливалась в пробирки, и производилось заражение спорой взвесью, через 48 часов оценивалась величина прозрачного слой под колонией плесени.
Два штамма из чая пуэр и зеленый аспергилл из кукурузы показали наибольшую активность в своих группах и на них была поставлена брага.

Доля обросшего плесенью зерна в брагах была 20%. Зерно для обрастания предварительно замачивалось 8-12 ч, затем засыпалось в п/п пакет и варилось в пакете на пару 30 мин, затем 30 мин остывало, далее заражалось споровой взвесью и обрастало 48 часов, каждые 12 часов усиленно перемешивалось. Споровая взвесь приготавливалась с применением антибиотиков. Состав браги был следующий: обросшая перловка 60 г, сечка кукурузная 240г, вода 1 л, дрожжи саф-левюр 5 г.  Браги приготавливались по холодной технологии. Браги на изолятах из пуэра отыграли примерно за 12 дней, а из кукурузы за 7, но как показала перегонка с штаммом зеленого аспергилла вышел недоброд, повторный опыт с ним показал что ферменты почему-то инактивируются к 6-7 дню, если добавить еще обросшего зерна процесс брожения возобновляется.

В ближайших планах провести экстракцию ферментов методом высаливания, сравнить активность с покупными ферментами, и оценить массу и активность производимых ферментов скажем на 100г обросшего зерна. А так же провести финальное тестирования и определить абсолютных победителей по скорости гидролиза крахмала/целлюлозы.

Вот микрофотография одного из штаммов изолированных из пуэра.
Скрытый текст
Брага на ферментах дикой плесени и не только
Брага на ферментах дикой плесени и не только. Сбраживание.
Оглавление:Литература:Калькулятор браги на закваске.
Владимир55 Научный сотрудник Новосибирск 5.7K 2.8K
Отв.1  14 Янв. 16, 19:48
Ну, ты братец крут!
Pilot Honda Доктор наук Екатеринбург 558 222
Отв.2  14 Янв. 16, 20:14, через 26 мин
автор, а чем твои дрожжи лучше именитых ЧКД? и сколько % набродят?
Ну я так напрямую спросил.
Вадим76 Специалист Донецк 173 27
Отв.3  14 Янв. 16, 21:13, через 59 мин
автор, а чем твои дрожжи лучше именитых ЧКД? и сколько % набродят?
Ну я так напрямую спросил.Pilot Honda, 14 Янв. 16, 20:14

Автор использовал плесени для осахаривания
мне захотелось самому изолировать штамм плесени для осахаривания крахмального сырья0kauri0, 14 Янв. 16, 14:12
А дрожжи были

дрожжи саф-левюр 5 г.0kauri0, 14 Янв. 16, 14:12
Pilot Honda Доктор наук Екатеринбург 558 222
Отв.4  14 Янв. 16, 22:42
Автор использовал плесени для осахариванияВадим76, 14 Янв. 16, 21:13
А по мне дак это изобретение велосипеда. Можно заниматься новым только для того что б превзойти старое. Иначе это топтание на месте и толчение воды в ступе. Пусть просто но за то понятно.
Если чо то я не микробиолог, я механик.
Вадим76 Специалист Донецк 173 27
Отв.5  15 Янв. 16, 09:34
Можно заниматься новым только для того что б превзойти старое.Pilot Honda, 14 Янв. 16, 22:42
Возможно и так, но если человек знает что делает, то почему бы не попробовать?
svarnoy Профессор Жуковский. 7.4K 3.6K
Отв.6  15 Янв. 16, 09:48, через 15 мин
0kauri0, Как с крахмалом разберёшься, приступай к экспериментам с целлюлозой.
Pilot Honda Доктор наук Екатеринбург 558 222
Отв.7  15 Янв. 16, 16:55
приступай к экспериментам с целлюлозой.svarnoy, 15 Янв. 16, 09:48
вот тут я согласен, бухло из газет, это что то новое будет 
Брага на ферментах дикой плесени и не только
Брага на ферментах дикой плесени и не только. Сбраживание.
Geek Новичок Владимир 999 164
Отв.8  15 Янв. 16, 17:11, через 17 мин
Как же скучно я живу.
Буду следить за темой.
Не забрасывай.

Можно заниматься новым только для того что б превзойти старое.
Дак если ни чем не заниматься как изобрести что-то новое?
0kauri0 Бакалавр SPb 50 120
Отв.9  15 Янв. 16, 18:21
приступай к экспериментам с целлюлозой.svarnoy, 15 Янв. 16, 09:48
3 штамма с наибольшей скоростью поедания целлюлозы (упаковка от яиц) также было отобрано из 3-х групп, но ставить брагу на "газетах" не стал по ряду причин:
1. скорость поедания целлюлозы оказалась в 2-4 раза меньше скорости поедания крахмала
2. культуральная жидкость при этом ужасно воняла
3. 1% раствор целлюлозы уже довольно густая жижа, для браги же надо 10% - 20%, это уже будет неразмешиваемая каша.
4. сомнительное качество самогона из "газет", прежде всего из-за большого содержания метанола
5. низкий выход спирта ~0.2 г/г из чистой целлюлозы

Штаммы у меня имеют одну латинскую букву и цифру в названии, чтобы в последующем не было путаницы, я буду их называть как есть. Буквы{цифры} следующие:
чай пуэр — P{0..5}
черный чай — B{1..2}
зеленый чай — G1
арахис —   N{1..4,6..7}
грецкий орех —  W{1..3}
кукурузная сечка — C{1..2,4..7}
лук — O1
перловка — Y1
кодзи для сладкого десерта — К1
винные кодзи — К{2..3}

Лидеры по скорости поедания крахмала: P2, P4, C2
Лидеры по скорости поедания целлюлозы: P2, P5, W2

Сейчас у меня стоит брага на Р2 на перловка/пшено/горох 1:1:1 общим весом 900 г, только процент обросшего зерна я уменьшил до 13% - бродит медленней, но бродит.
svarnoy Профессор Жуковский. 7.4K 3.6K
Отв.10  15 Янв. 16, 20:01
0kauri0, Прорыв в области прямой переработки целлюлозы в спирт будет несомненно, вопрос только во времени.
Может прорыв сделаете именно вы.
Теперь о плюсах: вам Нобелевку по химии и биологии сразу, нам бухло из газет.
Вот представьте:
Пошёл 1го января на базар, забрал ёлки не раскупленные, сбродил, выгнал джина на год вперёд.
Плинтуса дубовые, с ремонта оставшиеся, с соломой  сбродил, выгнал, вот и виски готовы.
Немного юмора. Но это очень перспективное направление.
mak Научный сотрудник Екатеринбург 6.1K 1.8K
Отв.11  15 Янв. 16, 20:18, через 17 мин
Но это очень перспективное направление.svarnoy, 15 Янв. 16, 22:01
технически быстрее и дешевле использовать серную кислоту
а для личного употребления я крахмальное сырье предпочитаю Смеющийся
svarnoy Профессор Жуковский. 7.4K 3.6K
Отв.12  15 Янв. 16, 20:37, через 19 мин
технически быстрее и дешевле использовать серную кислотуmak, 15 Янв. 16, 20:18
Под высоким давлением.
не у каждого в сарае есть столь прочная установка.
Pilot Honda Доктор наук Екатеринбург 558 222
Отв.13  15 Янв. 16, 23:26
1. скорость поедания целлюлозы оказалась в 2-4 раза меньше скорости поедания крахмала0kauri0, 15 Янв. 16, 18:21
тад твоей плесени надо нарастить зубы, а крахмал мы и ферментами на раз в сахара преобразуем без шума и пыли таксказать 
Брага на ферментах дикой плесени и не только
Брага на ферментах дикой плесени и не только. Сбраживание.
mak Научный сотрудник Екатеринбург 6.1K 1.8K
Отв.14  16 Янв. 16, 10:05
Pilot Honda, если негде ферментов будет купить и готового солода
то эта тема может быть не менее актуальна чем проращивание зерна Смеющийся
Слежу с интересом
Alex-8888 Научный сотрудник Алма-Ата 2.6K 1.1K
Отв.15  19 Янв. 16, 10:00
0kauri0, Добавил в закладки - интересно . Но до практического применения может не дойти . Повторяемость наверное непредсказуемая . Штаммы из одинакового "сырья" наверное разные получатся.
100ХВВЖ Специалист Верхняя Синячиха 126 66
Отв.16  19 Янв. 16, 11:18
Тема - огонь. Проконсультируйся с Абеттором. Он подскажет, как недопустить утечки биоматериала и предотвратить бактериологическую катастрофу в культурной столице. Не пренебрегай средствами индивидуальной защиты. Особо агресивные штаммы могут вызвать микоз, по сравнению с которым, молочница покажется тебе детским насморком.
0kauri0 Бакалавр SPb 50 120
Отв.17  19 Янв. 16, 13:34
Штаммы из одинакового "сырья" наверное разные получатся.
Alex-8888, 19 Янв. 16, 10:00
Так и есть в основном, кроме чая пуэр, который чаще всего заражают специально выведенной культурой.

Провел опыт по экстракции ферментов. 50 г перловки и 50 г воды готовились в пакете на пару 30 мин, после остывания были инокулированы спорой взвесью P2. Зерно для этого опыта обрастало 4 дня с перемешиваниями через 12 часов для предотвращения спорулирования.  После обрастания было залито 500 мл воды и поставлено на магнитную мешалку на час. Далее полученная жижа отправлена на вакуумную фильтрацию. После 5 проходов через самую мелкую фильтровальную бумагу получилось чуть мутновато.
В статьях обычно применяют центрифугирование очистки, но центрифуги нет ;( Промыл осадок и еще раз отфильтровал. Всего получилось 650 мл фильтрата, для высаливания было отобрано 200 мл и поставлено на магнитную мешалку. Обычно для этих целей применяют 70%-80% раствор NH4SO4 он лучше высаживает белки. В литературе я так же нашел что применяют насыщенный раствор NaCl , т.к. NH4SO4 нет будет применяться NaCl, растворимость NaCl ~35 г на 100 г воды. В стакан было порциями добавлено 70 г NaCl до растворения. Раствор немного помутнел но видимого осадка не выпало, пока что он поставлен в холодильник, дальше видно будет, но неудачный результат, тоже результат. Как оказалось, экстракция ферментов дело не простое, даже при наличии небольшой лабы, больше я этот опыт повторять не буду, оставшиеся 450 мл пойдут в следующую брагу.

Так же начал финальное тестирование амилолитической активности штаммов показавших наибольшую активность в предыдущих тестированиях. Была составлена питательная среда следующего состава г/л :
Крахмал     30
NH4NO3      1
KHPO4       1
MgSO4*7H2O  0,5
NaCl        0,5
K2SO4       0,5
Более питательная среда была выбрана для лучшей дифференциации активных штаммов, т.к. в предыдущих опытах некоторые штаммы показывали полное опустошение крахмала в пробирке. В пробирки было налито по 10 мл питательной среды, т.е. по 0,3 г крахмала в каждой. Они были инокулированы следующими штаммами:
P2, P3, P4, P5, C2, C3, C5, C6, N3, N7
, одна пробирка оставлена не зараженной. Все они поставлены в термостат с t=~30*C на 48 часов.

Так же хочу поделится статьями которые я нашел на тему изоляции/идентификации/токсикогенности штаммов плесеней, химическому и физическому мутагенезу, выделению амилолитических ферментов. Выложил их на https://drive.google.com/...TnNqRzZpUUF2UG8 или одним архивом https://drive.google.com/...b0hMZVZkc0RmZFU
IMG_20160119_134954.jpg
IMG_20160119_134954.jpg Брага на ферментах дикой плесени и не только. Сбраживание.
mak Научный сотрудник Екатеринбург 6.1K 1.8K
Отв.18  19 Янв. 16, 14:00, через 26 мин
выложи лучше одним архивом
74 файла без внятных названий скачивать и сортирвать..
Ralex Новичок Сарай-Бату 465 447
Отв.19  20 Янв. 16, 16:44
0kauri0, корейцы делают закваску для браги на пшенице, может на ней водится правильная плесень. В теме про соджу выкладывал видео данного процесса. Вспомнил об этом только сегодня, когда раскладывал на просушку пшеничный солод - на некоторых зёрнах появился серый налёт плесени.