Автор поста - mak210. Скопировано из темы "Вопросы начинающих ...", потому что весьма ценная информация про дрожжи от авторитетного автора. (Третий)=====================
Но чисто для теории хотелось бы разобраться , является ли раствор глюкозы с автолизатом - полноценной средой для размножения дрожжей ?gogolzmej, 05 Июля 12, 10:17
Конечно. Это называется плотная среда Сабуро.
Основой этой среды является дрожжевая вода. Для приготовления дрожжевой воды 70…100 г свежих прессованных дрожжей (7…10 г сухих дрожжей) кипятят в течение 20…30 мин в 1 л дистиллированной воды и отстаивают в высоком цилиндре на холоде 12 час. Отстоявшуюся жидкость декантируют, добавляют еще 1 л воды, кипятят 30 мин, фильтруют, доводят рН до требуемого значения. Приготовленную среду стерилизуют дробно по 20 мин 2…3 сут. К 100 мл стерильной дрожжевой воды добавляют 1% пептона, 2% агара, после растворения агара вносят 4% глюкозы или мальтозы, фильтруют, разливают в пробирки и стерилизуют при 0,05 МПа в течение 20 мин.
Среду можно готовить и на обычной 1%-ной пептонной воде.
Агар добавляют для гелеобразования.
Сабуро среды (R.J.A. Sabouraud) — селективные питательные среды для выращивания патогенных грибков, дрожжей и ацидофильных бактерий, а также для длительного хранения их культур.
В любом случае существует два способа существования дрожжей: брожение - дрожжи выделяют спирт, но практически не размножаются (всего до 2%), дыхание - в присутствии кислорода, спирта почти нет, но вся энергия тратится на рост популяции. Для полноценного роста необходимо наличие любых низкомолекулярных сахаров: мальтоза (солодовый сахар), сахароза (тростниковый), фруктоза (фруктовый), глюкоза (не более 3-5 остатков глюкозы), т.е. те сахара, которые в природе содержатся в ягодах и фруктах, на которых нативные дрожжи и живут. Глюкоза (виноградный сахар) наиболее легко и быстро потребляется. Однако для строительства новых клеток нужны также азот (производство белка новых клеток) и фосфор (ферментная система), можно в неорганической форме. Автолизат, являющийся выжимкой из клеток, помимо азота и фосфора, содержит также аминокислоты, ускоряющие синтез, хотя при выполнении вышеописанных условий дрожжам не больно нужны.
Так что основное условие размножения дрожжей не наличие автолизата - а, в первую очередь, кислород. Автолизат легко заменяется экстрактом солода или даже отваром картофеля.
знаменитый слоган Луи Пастера второй половины Х1Х века: "Брожение - это жизнь без кислорода". Он же открыл, что в присутствии кислорода набраживание спирта не происходит (эффект Пастера).
Картофельно-глюкозный агар. Очищенный и нарезанный ломтиками картофель массой 200 г заливают 1 л дистиллированной воды и кипятят в течение 1 часа. Отвар фильтруют, к фильтрату добавляют воду до первоначального объема, 2% глюкозы и 2…3% агар-агара. Среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при 0,1 МПа в течение 10 мин. При употреблении устанавливают рН 3,5 при помощи 10%-ного стерильного раствора безводной лимонной кислоты.
Солодовое сусло. 250…300 г ячменного сухого солода крупного помола заливают 1 л водопроводной воды, нагревают до 48-50 0С и, непрерывно помешивая во избежание образования комочков, поддерживают температуру в течение 30 мин. Затем температуру повышают до 55…58 0С, через 30 мин до 63 0С и на этом уровне выдерживают смесь до полного осахаривания крахмала. Готовую среду отжимают через полотняный фильтр, чтобы удалить дробину, затем фильтруют через складчатый бумажный фильтр. В фильтрате определяют концентрацию сухих веществ (СВ) при 20 0С, которая обычно составляет 18-20%. До нужной концентрации фильтрат разводят водопроводной водой. Для выращивания дрожжей солодовое сусло должно иметь концентрацию 6…8% СВ, для молочнокислых бактерий – 8…12% СВ, для мицелиальных грибов 3…4%, рН среды 5,6…6,0. При более низком значении рН сусло подщелачивают 10% раствором двууглекислой соды или гидроксида натрия. Далее сусло разливают в колбы или пробирки, закрывают их ватно-марлевыми пробками и стерилизуют при давлении 0,05 МПа 30 мин.
Для приготовления данной среды можно также использовать неохмеленное заводское пивное сусло, доведенное до определенного содержания СВ и рН.
Сусло-агар. При приготовлении сусло-агара к солодовому суслу добавляют 2% агара. Для микроорганизмов, образующих кислоты добавляют также немного мела. Среду стерилизуют 30 мин при давлении 0,05 МПа или дробно текучим паром.
Среда используется для выделения, выращивания и хранения дрожжей, мицелиальных грибов, молочнокислых и уксуснокислых бактерий.
ЗЫ Исключением является инулин (полимер фруктоза из топинамбура), для гидролиза которого дрожжи имеют ферменты и способны его потреблять и в более высокомолекулярной форме, чем пять остатков.