dee
Научный сотрудник
Минск
6.5K 1.7K
из "Практикума по микробиологии" Теппера:
Для изучения маслянокислого брожения можно воспользоваться питательной средой, состоящей из мясо-пептонного бульона с добавлением 3—5% глюкозы. Чтобы о этой среде развивались преимущественно маслянокислые бактерии, следует создать в ней строго анаэробные условия и после заражения ее почвой нагреть до кипения. При нагревании споры маслянокислых бактерий остаются жизнеспособными, а попавшие с водой неспорообразующие бактерии погибают.
Опыт ставят следующим образом.
В колбу Вюрца объемом 500 мл наливают 30-50 мл питательной среды, вносят примерло 0,5 почвы для заражения и четверть чайной ложки мела для нейтрализации образующейся к процессе брожения масляной кислоты. На асбестовой сетке нагревают колбу до кипения, не закрывая пробкой. Сняв колбу с огня, ее охлаждают под струей водопроводной воды, закрывают сверху каучуковой пробкой, а на боковой тубус надевают каучуковую трубку с винтовым зажимом. Присоединив колбу через каучуковую трубку к насосу (водоструйному или масляному насосу Камовского; удобнее пользоваться последним), открывают винтовой зажим и выкачивают из колбы воздух (до появления пузырьков в среде). Затем каучуковую трубку зажимают винтовым зажимом и колбу ставят в термостат при температуре 30-35 0С.
Для изучения маслянокислого брожения крахмала опыт ставят на среде с картофелем. Сырой неочищенный картофель нарезают мелкими кубиками, заполняют ими 1/3 высокой пробирки, добавляют немного мела (для нейтрализации масляной кислоты), заливают водопроводной водой на 2/3 и помещают в водяную баню при температуре 80 0С на 10 мин (для пастеризации). В среду не вносят ни почвы, ни маслянокислых бактерий, так как в кожуре картофеля споры их всегда имеются.
Элективные условия создаются следующими факторами: 1) крахмалом (источник углерода), используемым только микроорганизмами, содержащими фермент амилазу; 2) пастеризацией; 3) анаэробиозом — высокий столбик жидкости в пробирке и выделение в процессе брожения СО2 и Н2, вытесняющих воздух.
Через 2—3 дня картофель всплывает наверх вследствие бурно идущего газообразования.
По окончании брожения культуральную жидкость используют для микроскопирования маслянокислых бактерий и качественного определения продуктов брожения.
Качественной реакцией на масляную кислоту является получение маслянокислого железа (реакция с FeCl3). Нейтральные растворы маслянокислых солей при нагревании с FeCl3 приобретают коричневое окрашивание.
Из "Практикум по микробиологии" под редакцией профессора А. И. Нетрусова
Возбудителями маслянокислого и его разновидности ацетонобутилового брожения являются представители рода Clostridium. Они широко распространены в природе. Их можно выделить из почвы, навоза, силоса, с поверхности зерен злаков и даже из молока и сыра. Для получения накопительных культур видов этого рода можно воспользоваться некоторыми их особенностями. Поскольку споры клостридий терморезистентны, инокулят предварительно пастеризуют. Создавая анаэробные условия, исключают рост всех аэробных бактерий. Клостридиям доступны многие природные субстраты. Они способны гидролизовать полисахариды, белки, нуклеиновые кислоты и сбраживать мономеры, образующиеся в результате гидролиза. На этом основании в качестве источника углерода и энергии для сахаролитических клостридий используют углеводы или полисахариды (чаше всего крахмал), а для пептолитических — аминокислоты или белки. Некоторые клостридии используют молекулярный азот как единственный источник этого элемента, что может стать дополнительным фактором элективности при постановке накопительных культур,
В приложении 4 приводится ряд сред для получения накопительных культур клостридий: картофельная среда с мелом для сахаролитических клостридий, среда Виноградского для клостридий, фиксирующих молекулярный азот и т.д. Накопительную культуру возбудителя ацетонобутилового брожения Clostridium acetobutylicum можно получить на средах с кукурузным (ржаным, картофельным) затором. Пробирки со стерильным 7—8%-м кукурузным затором заражают зернами хлебных злаков или комочками почвы и пастеризуют на кипящей водяной бане в течение 45 с. Выращивают при 35 — 37 °С в запаянных ампулах или пробирках под слоем вазелинового масла. Для обогащения среды клостридиями делают несколько последовательных пересевов культуры на кукурузный затор, а затем высевают ее на чашки с картофельным агаром и выращивают в анаэробных условиях — в анаэростатах.
Приложение 4, пункт 11. Картофельная среда.
Используют в основном для культивирования спорообразующих бактерий, представителей рода Caulobacter и некоторых других хемоорганотрофных бактерий. В сухом веществе картофеля содержится 5 — 13 % азотистых веществ и около 75 % углеводов, он богат соединениями калия и фосфора, рядом витаминов. На картофельных средах хорошо развиваются микроорганизмы, образующие амилолитические ферменты, но чаще других на них выращивают представителей рода Clostridium.
Клубни картофеля, отобранные для приготовления этой среды, тщательно моют, очищают от кожуры, глазков и испорченных мест и снова моют. 200 г мелко нарезанного картофеля заливают 1 л водопроводной воды и кипятят 30 мин. Отвар фильтруют через вату, доводят объем фильтрата до 1 л и разливают в сосуды для культивирования.
Среду стерилизуют 1 ч при 1 атм или 30 мин при 1,5 ати, Необходимость длительной стерилизации обусловлена тем, что на картофеле всегда много спорообразующих почвенных форм микроорганизмов.
